一、物理参数与实验步骤：

储存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋运输。

产地：陕西西安

试剂中英文名称：pGBKT7-Lam Vector 酵母双杂交对照载体

载体类型：酵母双杂交系统载体

纯度：≥95%

载体大小：7.9kb

原核抗性：卡那霉素（Kanamycin, Kan）

克隆菌株：DH5α

载体标签：c-Myc

筛选标记：TRP1

启动子：ADH1

表达宿主： 酵母细胞

5'测序引物：T7: TAATACGACTCACTATAGGG

3'测序引物：根据序列设计引物

标签系统：C-Myc表位标签，用于Western Blot检测融合蛋白

保存条件：-20℃避光保存，运输需低温。

酵母双杂交系统：

酵母双杂交系统,又称蛋白阱捕获系统。

利用酵母双杂交系统能够快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,并能寻找、分离与已知蛋白相互作用的配体，在研究抗原和抗体相互作用、发现新的蛋白质和发现蛋白质的新功能、筛选药物作用位点及药物对蛋白互作影响、建立基因组蛋白连锁图等方面应用广泛。

使用优势：

高效排除假阳性：

通过Lamin C的惰性特性，精准识别Bait蛋白的自激活现象，确保蛋白质互作结果的可靠性。

标准化操作：

提供即用型对照载体，避免研究者重复构建阴性对照，节省时间和成本。

兼容性广泛：

与主流酵母双杂交系统（如Matchmaker Gold）兼容，可与pGADT7系列载体共转化酵母。

高灵敏度设计：

采用ADH1强启动子驱动融合蛋白高表达，配合TRP1筛选标记，确保对照实验的严格性。

二、关键注意事项

宿主菌株选择：

推荐Y2HGold、AH109等标准菌株，含多报告基因，提高检测灵敏度。

共转化与交配策略：

共转化：直接共转pGBKT7-Lam和猎物质粒，操作简便。

交配法：适用于文库筛选，但需控制交配时间避免过度生长。

培养基质量控制：

使用新鲜配制培养基，避免：

固体培养基不凝固（琼脂失效）。

颜色发黑（氧化或污染）。

假阳性排查流程：

步骤1：在SD/-Trp平板筛选pGBKT7-Lam转化子。

步骤2：阳性克隆与猎物共转化至四缺平板+3-AT，无生长则为有效阴性对照。

毒性蛋白处理：

Lamin C虽无毒性，但若实验组蛋白有毒性，需缩短培养时间或使用诱导型启动子。

西安强化生物同类型试剂整理如下：

Tide Fluor 1叠氮化物

Tide Fluor 6叠氮化物

Tide Fluor 2马来酰亚胺

Tide Fluor 1琥珀酰亚胺酯

Mag-520 Potassium Salt

Cal-630 AM,Cell Permeant

Rhod-5N AM,Cell Permeant

CopyCutter Induction Solution 诱导液

pGreen II 62-SK Plant Expression Vector

顺式玉米素 cis-Zeatin CAS：32771-64-5

BODIPY 581/591 C11 ， CAS：217075-36-0

Lewis-X (Lex) Trisaccharide 路易斯-X三糖，71208-06-5

Lewis-B (Leb) Tetrasaccharide 路易斯-B四糖，80081-06-7

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