&核心结构

载体基础

以 pGBKT7 载体为骨架，大小为 7.3 kb或 7.9 kb，差异可能源于不同版本或注释方式，但核心元件一致。

复制系统：

酵母中通过 2μ ori 实现高拷贝复制；

大肠杆菌中通过 pUC ori 复制，支持单链DNA制备。

关键功能元件

启动子与表达单元：

ADH1 启动子：驱动融合蛋白在酵母中高效组成型表达。

T7 启动子：位于 GAL4 DNA-BD 与 c-Myc 标签之间，支持体外转录/翻译。

融合蛋白结构：

GAL4 DNA-BD（DNA结合域，1-147 aa）：用于结合靶DNA序列。

人Lamin C蛋白：核纤层蛋白，因其在细胞核内定位且极少与其他蛋白随机互作，被选为阴性对照蛋白。

c-Myc表位标签：位于融合蛋白N端，用于Western blot等检测。

筛选标记：

原核抗性：卡那霉素抗性，用于大肠杆菌筛选。

真核筛选：TRP1 基因，使转化酵母可在缺色氨酸培养基（-Trp）中生长。

克隆位点：

多克隆位点（MCS） ：支持目标基因插入，构建Bait融合蛋白。

终止子：ADH1终止子与T7终止子，确保转录终止。

试剂信息

英文名称：pGBKT7-Lam Vector 酵母双杂交对照载体

载体类型：酵母双杂交系统载体

载体大小：7.9kb

原核抗性：卡那霉素（Kanamycin, Kan）

克隆菌株：DH5α

载体标签：c-Myc

筛选标记：TRP1

启动子：ADH1

表达宿主： 酵母细胞

5'测序引物：T7: TAATACGACTCACTATAGGG

3'测序引物：根据序列设计引物

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

&应用领域

酵母双杂交实验的对照设置

阴性对照组：

pGBKT7-Lam + pGADT7-T（或Prey载体）共转化酵母，在四缺培养基上应无生长，确认无自发激活。

实验组验证：若实验组（Bait-Y + Prey-X）在四缺培养基生长，需与阴性对照对比，排除假阳性。

假阳性排查

当Bait蛋白自身具有转录激活活性时，需先用pGBKT7-Lam验证其无自激活。

用于文库筛选中设置背景对照，提高互作结果可靠性。

载体构建与优化

作为pGBKT7载体的衍生版本，提供Lamin C融合模板，避免用户重复构建阴性对照。

支持插入新基因至MCS，但需注意Lamin C的定位可能影响某些Bait蛋白功能。

&相关试剂

(±)-Jasmonic acid

YPDA Agar Medium

免疫印迹及免疫沉淀用裂解液

Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit

Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit

Carboxy-PTIO一氧化氮(NO)清除剂

S-Nitrosoglutathione(GSNO)亚硝基谷胱甘肽

DAF-FM DA(5mM in DMSO)一氧化氮(NO)荧光探针

Sodium Nitroprusside(SNP)Dihydrate硝普钠二水合物

1,2-Diaminoanthraquinone (DAA,DAQ)1,2-二氨基蒽醌

2,3-Diaminonaphthalene (DAN), Suitable for fluorescence 2,3-二氨基萘

XL1-Blue Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！